产品名称：AF594 标记链霉亲和素偶联物，AF594 标记链霉亲和素偶联物

AF594 标记链霉亲和素偶联物是生物医学研究中应用广泛的荧光检测工具，由链霉亲和素（Streptavidin）与 Alexa Fluor 594（AF594）荧光染料通过共价偶联制备而成。该复合物利用链霉亲和素与生物素（Biotin）之间极强的特异性相互作用（解离常数 Kd 约为 10⁻¹⁵ M，是已知自然界中最强的非共价相互作用之一），结合 AF594 优异的红色荧光性能，可实现对生物素标记分子（如生物素化抗体、生物素化核酸、生物素化探针）的靶向识别、定位与定量，在免疫检测、分子杂交、细胞成像等领域具有不可替代的作用。

首先，链霉亲和素（Streptavidin）是该偶联物的 “靶向核心”，其来源与结构特性决定了其高亲和力与特异性。链霉亲和素是从链霉菌（Streptomyces avidinii）发酵产物中提取纯化的四聚体蛋白，分子质量约为 60 kDa，每个四聚体由 4 个相同的亚基组成，每个亚基含一个生物素结合位点，因此一个链霉亲和素分子可同时结合 4 个生物素分子，这种多价结合特性使其与生物素标记分子的结合具有极高的稳定性与亲和力。与亲和素（Avidin，从蛋清中提取）相比，链霉亲和素具有显著优势：一是等电点低（pI 约为 5.0-6.0，亲和素 pI 约为 10.5），在生理 pH 条件下呈弱酸性，不易与带负电的生物分子（如核酸、细胞膜蛋白）发生非特异性静电结合，降低实验背景信号；二是不含碳水化合物修饰，避免了亲和素因糖基化带来的非特异性结合（如与细胞表面的凝集素结合），进一步提高检测特异性；三是溶解性好，在广泛的缓冲液条件下（如 PBS、Tris-HCl）均能保持良好的溶解性，不易发生聚集，确保偶联反应的效率与探针的稳定性。这些特性使链霉亲和素成为生物素 - 亲和素系统（Biotin-Avidin System，BAS）中最常用的结合蛋白，为 AF594 标记偶联物的高特异性检测奠定基础。

其次，Alexa Fluor 594（AF594）作为荧光标记基团，为偶联物提供了优异的光学性能，满足多种生物成像需求。AF594 是一种红色荧光染料，属于罗丹明类衍生物，其最大激发波长约为 590 nm，最大发射波长约为 617 nm，发射明亮的红色荧光，与荧光显微镜的罗丹明（Rhodamine）或 Texas Red 滤光片系统完全兼容，便于实验操作与信号采集。相较于传统红色荧光染料（如 Cy3、罗丹明 6G），AF594 具有以下核心优势：一是高荧光量子产率（约 0.65），在低浓度下即可产生强荧光信号，降低偶联物用量，减少非特异性结合与对生物样本的潜在毒性（如对活细胞的损伤），尤其适合微量样本检测或活细胞成像；二是极强的抗光漂白能力，通过化学结构修饰（如引入刚性环结构、增强分子稳定性），AF594 的光漂白速率较传统染料降低约 50%，可耐受长时间的激光照射（如共聚焦显微镜的连续扫描，时长可达 1-2 小时），适合动态观察生物分子的运动或相互作用（如生物素化受体在细胞膜上的迁移）；三是宽 pH 稳定范围（pH 4.5-8.5），在细胞内酸性环境（如溶酶体，pH 4.5-5.5）或中性环境（如细胞质，pH 7.2-7.4）中，荧光强度波动小于 15%，确保不同细胞区域或实验条件下荧光信号的准确性；四是低光谱重叠，AF594 的荧光光谱与绿色（如 AF488）、蓝色（如 DAPI）荧光染料的重叠度极低，便于多色荧光共标记实验，可同时检测多个生物分子（如同时检测生物素化抗体标记的蛋白 A、AF488 标记的蛋白 B、DAPI 标记的细胞核），实现多维度生物学信息的获取。

在化学偶联制备过程中，需采用温和且高效的反应策略，确保链霉亲和素的生物素结合活性与 AF594 的荧光性能不受破坏。通常，AF594 以活性酯（如 NHS 酯，N - 羟基琥珀酰亚胺酯）的形式参与反应 ——AF594-NHS 酯的活性基团可与链霉亲和素分子上的氨基（主要来自赖氨酸残基的 ε- 氨基，每个链霉亲和素亚基含约 4 个赖氨酸残基）发生酰胺化反应，形成稳定的共价键，将荧光染料偶联到蛋白上。偶联反应需在严格控制的条件下进行：一是反应缓冲液选择，通常使用 pH 7.2-7.5 的 PBS 缓冲液，避免使用含氨基的缓冲液（如 Tris-HCl），防止缓冲液中的氨基与 NHS 酯竞争反应，降低偶联效率；二是摩尔比例控制，AF594 与链霉亲和素的摩尔比通常为 4-6:1，这一比例可确保每个链霉亲和素四聚体偶联 4-6 个 AF594 分子 —— 偶联数量过少会导致荧光信号强度不足，影响检测灵敏度；数量过多则可能因染料分子的空间位阻效应，遮蔽链霉亲和素的生物素结合位点，导致其结合活性下降；三是反应温度与时间，室温（20-25℃）孵育 1-2 小时，避免高温（＞30℃）导致链霉亲和素变性或低温（＜4℃）延长反应时间。偶联完成后，需通过凝胶过滤层析（如 Sephadex G-25 或 Superdex 75 层析柱）去除未偶联的游离 AF594—— 游离染料会产生非特异性荧光信号，干扰检测结果，因此必须彻底去除；同时，采用离心超滤（截留分子量 30 kDa）进一步纯化产物，去除可能存在的蛋白聚集物，确保偶联物的均一性。

产地：西安

规格：50mg 100mg 500mg

纯度：95%

状态：固体/粉末

储藏条件：冷藏

温馨提示：仅用于科研，不能用于人体实验！

西安齐岳生物科技有限公司是一家集研发，生产，销售为一体的高科技企业，可提供合成磷脂、高分子聚乙二醇衍生物、嵌段共聚物、顺磁/超顺磁性纳米颗粒、纳米金及纳米金棒、近红外荧光染料、活性荧光染料、荧光标记的葡聚糖BSA和链霉亲和素、蛋白交联剂、小分子PEG衍生物、点击化学产品、树枝状聚合物、环糊精衍生物、大环配体类、荧光量子点、透明质酸衍生物、石墨烯或氧化石墨烯、碳纳米管、富勒烯等等，可以满足不同客户的定制需求。

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小编：HLL 2025年9月4日