CY7-Thyroglobulin-Human，CY7标记人甲状腺球蛋白的反应步骤

人甲状腺球蛋白（Thyroglobulin, Tg）是一种高分子量、富含糖基化位点的分泌型糖蛋白，构象中存在多处赖氨酸残基、少量半胱氨酸与可氧化的糖链邻二醇位点，适合通过多种化学位点进行荧光标记。CY7为近红外区域的花菁染料，具有长波长激发/发射、组织自发荧光干扰低、光学穿透力较强等特点；其衍生物常见为NHS活性酯、马来酰亚胺、叠氮/炔、肼/氨氧等官能化形式，可分别靶向赖氨酸ε-氨基、巯基或经糖链氧化产生的醛基进行偶联。构建CY7-Tg的关键在于：一是选择与蛋白位点匹配的偶联化学以兼顾反应选择性与构象完整性；二是控制标记程度（degree of labeling, DOL），避免过度标记引起构象改变或自猝灭；三是采用亲水连接臂（如短PEG）缓解疏水染料对蛋白溶解性与聚集的影响。成品通常通过凝胶过滤或透析去除游离染料，并以UV-Vis定量DOL、SDS-PAGE荧光成像与质控谱学确认纯度与荧光完整性。应用层面，该探针可用于近红外成像示踪、免疫化学检测、亲和相互作用研究与载体行为分析等非指向的场景。

反应步骤（高层流程要点）

路线A：赖氨酸-NHS酯标记

缓冲体系准备：使用能保持赖氨酸侧链去质子的缓冲体系，避免与活性酯发生副反应的成分。

活化染料配置：以无胺、无水环境快速配制CY7-NHS衍生物，避免水解。

偶联反应：将染料与Tg按设定摩尔比混合，温和避光孵育，使NHS与ε-NH2形成稳定酰胺键。

终止与纯化：反应后以惰性胺或缓冲换液终止残余活性酯，随后进行凝胶过滤/透析去除游离染料与小分子。

质控与表征：测定蛋白与染料吸收峰比值估算DOL，检测荧光谱与电泳条带，确认单分散性与无明显聚集。

路线B：巯基-马来酰亚胺标记（更高位点选择性）

巯基引入：若巯基不足，可用温和的氨硫醇化试剂在赖氨酸侧链引入-SH，同时尽量保持二硫键结构。

偶联反应：将CY7-马来酰亚胺与含-SH的Tg在中性偏弱碱条件下反应，形成稳定硫醚键。

纯化与表征：同路线A，重点确认未交联聚集的产生与DOL的可控性。

路线C：糖链-肼/氨氧化学（位点更外露）

温和氧化：对Tg糖链的邻二醇温和氧化生成醛基，避免主链损伤。

缩合连接：以CY7-肼或-氨氧基衍生物与醛基缩合，必要时采用可逆-可稳定化策略（如肟/腙后续还原）。

纯化与验证：同上，并关注糖链修饰对构象与亲和位点的影响。

通用注意点

全程避光操作，优先选择亲水连接臂的CY7衍生物以减少疏水聚集。

通过小规模条件摸索确定目标DOL区间，再放大制备。

纯化后以吸收/发射光谱评估荧光完整性，必要时补充动态光散射与尺寸排阻色谱评估聚集。

成品分装、避光、在适宜条件下保存，减少冻融循环；使用前先做功能性结合或免疫反应活性测试以确认构象未受影响。

产品名称：CY7-Thyroglobulin-Human，CY7标记人甲状腺球蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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