CY7-Penaeus-Allergen，CY7标记虾过敏原的合成过程概述

CY7标记虾过敏原（CY7-Penaeus-Allergen）是一种将近红外荧光染料CY7通过共价偶联标记在虾过敏原蛋白分子上的功能性复合物。虾过敏原主要是虾体内的结构蛋白和肌肉蛋白，如热稳定肌球蛋白（tropomyosin）等，这些蛋白易引起免疫系统识别而导致过敏反应。通过CY7标记，可赋予过敏原近红外荧光特性，便于在体外免疫分析、蛋白质分布追踪及生物成像中实现高灵敏检测，同时保留其的免疫表位结构。

合成过程概述

CY7-Penaeus-Allergen的制备主要依赖CY7活性衍生物（如NHS酯或马来酰亚胺）与过敏原蛋白分子上的氨基或巯基形成共价键。蛋白分子表面富含赖氨酸残基和少量半胱氨酸，为偶联提供理想位点。偶联设计需避免关键免疫表位的修饰，以确保荧光标记后过敏原仍可被特异性抗体识别。

蛋白质溶液准备

首先，将虾过敏原蛋白溶解在中性或弱碱性缓冲液（如PBS, pH 7.4–8.0）中，浓度通常在1–5 mg/mL。缓冲液应不含胺基或巯基抑制剂，以保证偶联反应的效率。同时，应保持溶液温和、避光，以保护蛋白质的构象和功能活性。

CY7活性衍生物制备

CY7染料通过化学修饰制备为NHS酯或马来酰亚胺形式，溶解于少量DMSO中，避免水解或光降解。染料与蛋白质的摩尔比根据实验设计调控，通常在1:5至1:20范围内，以控制标记密度，既保证荧光信号强度，又避免蛋白质聚集或功能受损。

偶联反应

将CY7活性衍生物缓慢加入过敏原溶液中，轻轻搅拌均匀。赖氨酸胺基对CY7-NHS酯羰基碳进行亲核攻击，形成稳定酰胺键；若使用马来酰亚胺，则半胱氨酸巯基可与其发生Michael加成，生成硫醚键。反应温度通常控制在室温至37°C，反应时间约为数小时至一夜，根据标记效率实时监控。

反应监控与优化

偶联过程中，可通过紫外-可见光谱或荧光光谱实时监测CY7吸收和发射峰的变化，判断偶联效率。同时可通过免疫检测评估蛋白质免疫表位的保留情况。调整pH、温度、反应时间及摩尔比，可优化偶联效率与蛋白质功能平衡。

纯化过程

透析或超滤

反应完成后，体系中可能存在未反应的CY7、低分子副产物及微量聚集体。透析或超滤可有效去除游离染料及小分子杂质，同时富集标记蛋白。透析膜或超滤膜孔径需选择适合过敏原分子量的规格，以防产物流失。

凝胶过滤层析（Gel Filtration）

进一步纯化可采用凝胶过滤层析，利用分子筛作用将CY7-Penaeus-Allergen与低分子杂质或偶联副产物分离，保证高纯度产物。此步骤有助于改善蛋白质均一性和稳定性。

高效液相色谱（HPLC）

对于要求高纯度的实验，可使用反相或亲和HPLC进一步分离。通过近红外检测（约750 nm）确定CY7标记产物峰，收集纯化产物，并进行冻干保存或溶解在缓冲液中备用。

表征与功能验证

光谱分析

UV-Vis光谱用于确认CY7吸收峰及蛋白质特征吸收；荧光光谱检测近红外发射性能，评估标记效率。

分子量与纯度分析

SDS-PAGE结合荧光扫描可验证标记产物分子量及纯度，质谱（MS）分析进一步确认偶联位点和均一性。

功能性验证

通过抗体结合实验或免疫反应分析，验证标记后过敏原免疫表位保持完好，确保复合物可用于生物示踪、免疫分析及体外检测实验。

总之，CY7-Penaeus-Allergen通过合理的偶联反应及严格纯化，获得高纯度、结构稳定且荧光性能优异的标记蛋白，可应用于过敏原研究、免疫分析以及近红外生物成像等领域。

产品名称：CY7-Penaeus-Allergen，CY7标记虾过敏原

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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