CY7-Fetoprotein，CY7甲胎蛋白的反应条件控制方法

CY7-甲胎蛋白（CY7-Fetoprotein, CY7-AFP）是通过将近红外荧光染料Cyanine7（CY7）与甲胎蛋白（Alpha-fetoprotein, AFP）偶联得到的一类荧光标记蛋白复合物。AFP是一种分子量约70 kDa 的糖蛋白，含有多个赖氨酸残基的ε-氨基和较少的半胱氨酸巯基，这些功能基团为其提供了与荧光染料衍生物反应的位点。CY7作为典型的近红外荧光染料，具有长波长激发与发射、高组织穿透力和低背景信号等优势，偶联后得到的CY7-AFP可用于体内外成像、蛋白定位研究以及高灵敏度检测实验。

在构建CY7-AFP的过程中，关键步骤是将活性化的CY7衍生物与AFP的氨基或巯基发生特异反应。常用的染料形式为CY7-NHS酯或CY7-马来酰亚胺（CY7-Maleimide），分别与赖氨酸氨基和半胱氨酸巯基反应。

具体反应步骤如下：

蛋白缓冲液准备

AFP需溶解在适宜的缓冲体系中。若使用NHS酯标记，通常选择无胺的缓冲液，如0.1 M碳酸盐缓冲液（pH 8.3）；若使用马来酰亚胺标记，则适合pH 6.5–7.2 的磷酸盐缓冲液，以保持巯基活性。避免使用含Tris或甘氨酸的缓冲液，因为其氨基会与NHS酯竞争反应。

蛋白预处理

在巯基标记方案中，若AFP巯基处于二硫键状态，需要先用温和的还原剂（如TCEP）处理，暴露自由巯基，以便与CY7-Maleimide发生反应。还原剂应在反应前除去，以免与染料竞争。

活性染料溶液准备

CY7-NHS酯或CY7-Maleimide通常以DMSO或DMF为溶剂溶解，浓度为1–10 mM。由于染料分子易光漂白，整个操作应避光进行。

偶联反应

将CY7衍生物按摩尔比（通常是5–20倍于AFP的摩尔量）加入到蛋白溶液中，在避光条件下轻轻混合。NHS酯与蛋白赖氨酸氨基的反应机理是：氨基的孤对电子进攻NHS酯的羰基碳，形成四面体中间体，释放NHS离去基团，终生成稳定的酰胺键。马来酰亚胺与巯基的反应机理为Michael加成，巯基作为亲核体攻击马来酰亚胺双键，生成稳定的硫醚键。

反应条件控制

NHS酯反应时间通常为0.5–2 h，温度为室温；马来酰亚胺反应一般在较短时间内完成（30–60 min）。在此过程中需避免高温和强光，以保持蛋白活性和染料稳定性。

纯化步骤

反应完成后，混合物中既包含标记产物，也含有未反应的游离染料。常用的纯化方法为凝胶过滤层析（如Sephadex G-25）或超滤离心。纯化过程中，结合了染料的AFP因分子量较大而与游离染料分离，从而得到高纯度的CY7-AFP。

表征分析

标记产物需通过紫外-可见光谱和荧光光谱进行检测。CY7的吸收峰约为750 nm，AFP的蛋白吸收峰在280 nm，两者的比值可用于计算标记效率。一般目标标记度为2–5个染料分子/蛋白，以保证荧光信号强度而不影响蛋白功能。

总结：CY7-甲胎蛋白的制备依赖于NHS酯或马来酰亚胺活化染料与AFP上氨基或巯基的共价偶联，整个反应过程包括缓冲液选择、蛋白预处理、染料溶解、偶联反应、纯化与表征六个主要步骤。通过这些步骤得到的CY7-AFP不仅保持了AFP的蛋白特性，同时具备稳定的近红外荧光特性，为其在体内成像、分子示踪与高灵敏度检测提供了可靠的工具。

产品名称：CY7-Fetoprotein，CY7甲胎蛋白

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

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