Cy5 酪胺(Cy5-Tyramide, Cy5-TSA) 是一种常用的荧光标记化学试剂,属于 tyramide signal amplification(TSA,酪胺信号放大)体系的一部分。它结合了酪胺的过氧化物酶底物特性与 Cy5 荧光团的强荧光特性,使其在高灵敏度生物检测和成像中得到广泛应用。Cy5 是一种红色荧光染料,具有吸收波长约为 650 nm,发射波长约为 670 nm 的特点,荧光强度高且光稳定性良好。
化学结构与基本特性
Cy5-TSA 的核心由两个部分组成:一端是 Cy5 荧光团,另一端是酪胺(tyramide)基团。酪胺基团在存在过氧化氢(H₂O₂)和过氧化物酶(如辣根过氧化物酶 HRP)催化的条件下,可形成高活性的自由基。这些自由基能够共价结合到靶分子附近的酪氨酸残基上,实现靶向标记。Cy5 荧光团通过共轭体系提供强烈的红色荧光信号,使标记位置在荧光显微镜或其他荧光检测系统下清晰可见。
应用领域
免疫组织化学(IHC)与免疫细胞化学(ICC)
Cy5-TSA 可用于组织切片或细胞样本的高灵敏度标记。它能够放大信号,使低丰度蛋白或弱表达标记物的检测变得可行。
原位杂交(FISH, ISH)
在原位杂交实验中,Cy5-TSA 可与核酸探针结合,用于检测特定 RNA 或 DNA 序列的位置和表达水平。
多重标记实验
由于 Cy5 的红色荧光特性,它常与其他荧光染料(如 FITC、Cy3)组合使用,实现多重标记的同时检测多个靶分子。TSA 的高灵敏度特性使得即使在多重标记情况下,也能保持清晰的信号。
单分子成像与高分辨率显微技术
Cy5-TSA 的高光稳定性和强信号输出特性,使其适合用于单分子检测和超分辨率显微成像,如 STED 或 PALM。
使用注意事项
光敏性与储存
Cy5 是光敏性染料,应避免长时间暴露在强光下。通常建议将试剂储存在 -20°C 避光干燥环境中,以保持荧光性能。
实验条件优化
TSA 反应条件需严格控制,包括 H₂O₂ 浓度、HRP 酶量和反应时间,以避免背景信号过高或非特异性结合。
中文名称:荧光染料Cy5 酪胺
英文名称:Cy5-TSA
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
供应:西安齐岳生物科技有限公司
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