FITC-Fibrinogen，荧光素标记纤维蛋白原的合成过程

FITC-Fibrinogen（荧光素标记纤维蛋白原）是一种通过将异硫氰酸荧光素（FITC, Fluorescein isothiocyanate）与血浆蛋白纤维蛋白原（Fibrinogen）偶联形成的荧光标记分子。纤维蛋白原是一种高分子量（约340 kDa）多亚基血浆蛋白，由两条Aα链、两条Bβ链和两条γ链组成，具有丰富的赖氨酸残基及多个可反应氨基位点。通过FITC标记，可以在保留纤维蛋白原结构和功能的同时，实现其在生物化学实验和细胞研究中的荧光示踪和定量分析。

在化学偶联上，FITC-Fibrinogen的核心反应依赖于FITC分子中的异硫氰酸基团（–N=C=S）与纤维蛋白原赖氨酸侧链的伯胺（–NH2）发生亲核加成反应，形成稳定的硫脲键（–NH–C(=S)–NH–）。这一反应在弱碱性条件下（pH 8.0–9.0）进行，以保证蛋白氨基去质子化，提高亲核性，并程度地维持蛋白质三维结构的稳定。反应通常在低温（4–10℃）下进行数小时至过夜，以减少蛋白质变性和聚集，同时避免FITC光降解。

具体的合成过程包括以下步骤：首先，将纤维蛋白原溶解于适当的碳酸盐缓冲液或磷酸盐缓冲液中，调节pH至弱碱性，以保证赖氨酸氨基活性；随后，将FITC溶解于干燥的有机溶剂（如DMSO）中，缓慢加入蛋白溶液，混合均匀后在避光条件下温和反应。FITC与蛋白分子的偶联效率受pH、温度、溶剂体系及FITC与蛋白摩尔比影响，通常需要优化这些条件以获得高标记率，同时避免蛋白质结构破坏。

在纯化过程中，反应体系中通常含有未反应的FITC、小分子副产物及可能的蛋白聚集物。常用的纯化方法包括透析、凝胶过滤（GPC）或离心超滤等，以去除自由FITC和低分子杂质，同时保持蛋白分子完整性。透析通常使用分子量截断适合的膜（如10–30 kDa），在缓冲液中多次更换，直至自由FITC浓度降低至可接受水平。凝胶过滤可进一步分离标记蛋白与小分子杂质，保证产物的均一性。纯化后的FITC-Fibrinogen通常储存在含有低浓度剂（如0.02% NaN3）和稳定盐缓冲液中，并在低温避光条件下保存。

表征方面，FITC-Fibrinogen的成功标记可通过紫外-可见光谱和荧光光谱检测。UV-Vis谱显示FITC特征吸收峰（约495 nm），荧光光谱显示发射峰（约520 nm），可评估标记效率和荧光强度。此外，可通过SDS-PAGE联合荧光成像进一步确认标记蛋白的完整性和均一性。蛋白浓度可通过比色法或UV吸光度测定（280 nm）进行定量，同时结合荧光强度评估标记密度。

FITC-Fibrinogen的标记不仅保留了纤维蛋白原的构象和功能位点，还赋予了荧光可视化能力，使其应用于血凝研究、血栓模型实验、细胞黏附及蛋白相互作用研究。其合成过程强调温和的反应条件、缓冲体系控制和高效纯化方法，保证产物在实验中的稳定性和可重复性。通过合理设计标记比例和优化纯化步骤，FITC-Fibrinogen可以作为高效、稳定的荧光示踪分子，为生物化学研究和细胞实验提供可靠工具。

产品名称：FITC-Fibrinogen，荧光素标记纤维蛋白原

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

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