Biotin phosphoramidite，生物素亚磷酰胺的介绍-UDP糖丨MOF丨金属有机框架丨聚集诱导发光丨荧光标记推荐西安齐岳生物

Biotin phosphoramidite（生物素亚磷酰胺）是一类用于寡核苷酸化学合成的生物素标记单体，通过将生物素（D-生物素）与标准磷酰胺修饰化学结合，使其能够在 DNA 或 RNA 合成过程中实现可控、定点且高效率的生物素化修饰。生物素与链霉亲和素（streptavidin）之间具有亲和力（Kd 约 10⁻¹⁵ M），因此使用生物素修饰的核酸可用于高特异性的固定化、纯化、捕获、成像及信号放大，是核酸技术中应用广泛的功能标签之一。

生物素亚磷酰胺的核心结构包括：生物素本体、连接臂（linker，可为 C3、C6、PEG 类等）以及带有典型 2-氰乙氧基保护基团的磷酰胺结构。连接臂的引入可以增加生物素与核酸骨架的空间距离，有助于在后续的链霉亲和素结合反应中减少空间阻碍，提高结合效率。例如，含有长链 PEG 连接臂的生物素亚磷酰胺更加柔性并可改善在溶液中的可及性，是现代核酸合成中更常用的设计。

在固相合成中，Biotin phosphoramidite 可在任意循环中加入，常见的是作为 5’ 端修饰使用。其溶解性良好，可在无水乙腈中制得 0.05–0.1 M 的溶液，并与标准活化剂体系兼容，包括 tetrazole、DMT-MM、ETT 等。由于生物素结构较为复杂，建议适当延长偶联反应时间，以确保较高的修饰成功率。生物素的保护基通常设计为可在氨解或温和脱保护条件下移除，因此能够与标准 DNA 合成的脱保护步骤兼容。

生物素化寡核苷酸的用途非常广泛：

固相捕获与纯化：利用生物素与链霉亲和素的超强结合力，可将生物素 DNA 固定在磁珠、ELISA 板、膜表面或微流控芯片中，用于靶标捕获、洗脱与检测。

核酸探针构建：包括生物素化的原位杂交探针、PCR 引物、DNA 环片段、单链 DNA 模板等，用于成像、FISH 或富集。

酶促反应体系中用作标签：如在免疫-PCR（IPCR）中通过生物素-链霉亲和素体系实现高灵敏度信号放大。

下一代测序（NGS）：生物素化核酸可用于文库构建中的靶向捕获步骤，如 exome capture、ChIP-seq 捕获、CRISPR off-target 捕获等。