Fluo-3 AM(全名:Fluo-3 acetoxymethyl ester)是一种广泛应用于生物医学研究中的钙离子(Ca²⁺)荧光探针。
1. Fluo-3 AM 的结构与特点
Fluo-3 AM 是一种荧光染料,属于钙离子指示剂类,它的化学结构中含有一个荧光染料部分和一个AM(acetoxymethyl)酯基团。AM酯基团使得Fluo-3 AM能够顺利通过细胞膜进入细胞内。进入细胞后,AM基团会被细胞内的酯酶水解,释放出活性的Fluo-3荧光探针。Fluo-3本身是一种能与钙离子结合的荧光探针,当钙离子与其结合时,Fluo-3的荧光特性发生变化,使得其发射的荧光强度与钙离子的浓度成正比。
2. Fluo-3 AM 在细胞钙离子监测中的应用
Fluo-3 AM 常用于实时监测细胞内钙离子浓度的变化,尤其是在细胞刺激过程中。以下是Fluo-3 AM的主要应用领域:
钙离子流入的监测:Fluo-3 AM 能够在细胞膜上电位变化或受体激活等刺激下,监测钙离子流入的变化。例如,神经细胞的兴奋性和心肌细胞的收缩过程与细胞内钙离子的动态变化密切相关。
钙离子浓度的定量检测:Fluo-3 AM 能够通过荧光信号的强度变化实时反映细胞内钙离子的浓度水平。这种定量能力使得它成为研究钙信号传导途径、药物筛选和毒理学研究中的重要工具。
高通量筛选:由于其荧光信号可以通过荧光显微镜或荧光板读数器进行快速检测,Fluo-3 AM 已广泛用于高通量筛选实验中,特别是在寻找影响钙离子通道或钙信号传导的药物时。
中文名称:钙离子荧光探针,Fluo-3 AM
用途:科研
状态:固体/粉末/溶液
保存:冷藏
供应:西安齐岳生物科技有限公司

3. Fluo-3 AM 的荧光特性
Fluo-3 AM 是一种绿色荧光染料,其荧光发射波长约为530 nm,当钙离子与其结合时,荧光强度显著增强。Fluo-3 AM 的激发波长通常为488 nm,与常用的激光激发光源相匹配。因此,它适合使用流式细胞仪、荧光显微镜等设备进行荧光检测。
Fluo-3 AM的一个显著特点是其较高的灵敏度和选择性。它在低浓度钙离子的环境下也能准确响应,适合于研究钙离子浓度变化较小的生理过程。此外,Fluo-3 AM对钠离子、钾离子等其他离子的干扰较小,具有较高的选择性。
4. Fluo-3 AM 的实验操作
使用Fluo-3 AM进行实验时,通常需要遵循以下步骤:
溶解和加载:Fluo-3 AM以冻干粉末的形式提供,使用适当的溶剂(如DMSO)溶解后,加入到培养的细胞中。为了确保探针能够进入细胞,通常会在培养基中添加一定浓度的Fluo-3 AM(一般为1-5 µM),并让其与细胞共同培养30分钟至1小时。
酯基水解:在细胞内,Fluo-3 AM的酯基通过细胞内酯酶的作用被水解,从而释放出活性的Fluo-3探针。
钙离子浓度监测:通过荧光显微镜或流式细胞仪,实时监测细胞内Fluo-3的荧光变化。钙离子浓度的变化会直接影响Fluo-3的荧光强度,进而反映细胞内钙离子的动态变化。
5. 注意事项和挑战
尽管Fluo-3 AM是一个非常强大的工具,但在实际应用中仍然需要注意以下几个方面:
探针泄漏:Fluo-3 AM在一些情况下可能会发生探针泄漏,即在细胞内的Fluo-3水解后,部分荧光信号可能来自细胞外。因此,在实验设计中需要考虑适当的阴性对照。
荧光饱和:过高的钙离子浓度可能导致荧光信号的饱和,从而影响结果的准确性。因此,在实验中需要确保Fluo-3 AM的使用浓度和钙离子浓度适宜。
细胞类型差异:不同细胞类型对Fluo-3 AM的吸收和反应可能有所不同,因此,在不同类型的细胞中进行实验时,需要优化实验条件。
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