半抗原药物偶联载体蛋白的多种方法综述！

西安齐岳生物提供将小分子物质（如药物、半抗原等）或大分子物质（如酶、蛋白毒素）等一共价键的方式连接于蛋白分子（（OVA、BSA、HSA），以制备人工抗原酶标抗体等。

小分子半抗原药物与载体蛋白偶联效果会受到偶联物的浓度及其相对比例、偶联剂的药物浓度及其相对量、缓冲液成分及其纯度和离子强度、pH以及半抗原的稳定性、可溶性和理化特性等因素的影响。通常是在条件温和的水溶液中将半抗原与载体蛋白共价结合，不宜在高温、低温、强碱、强酸条件下进行，一般是由半抗原上的活性基团决定偶联合成的方法。

简要介绍下半抗原与载体偶联方法：

1，带羧基或者氨基类的化合物，用碳化二亚胺法以及混合酸酐法；

2，含巯基类的化合物，用马来酰亚胺法；

3，分子结构中带有氨基类的化合物，戊二醛法，是常用的一种方法。

常用的方法如下:

1.分子中含有羧基或者可羧化的半抗原的偶联

1)混合酸酐法(也称氯甲酸异丁酯法)。

半抗原上的羧基在正丁胺存在下与氯甲酸异丁酯反应，形成混合酸酐的中间体，再与蛋白质的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物

2)碳二亚胺法(CDI):

碳二亚胺(EDC)使羟基和氨基间脱水形成酰胺键，半抗原上的羧基先与EDC反应生成一个中间物，然后再与蛋白质上的氨基反应，形成半抗原与蛋白质的结合物。 如果半抗原分子中不含羧基，可通过某些化学反应引入羧基。在引入羧基后，也可用上述方法进行偶联。

2.含有氨基或可还原硝基半抗原的偶联

1 )戊二醛法:

双功能试剂戊二醛的两个醛基分别与半抗原和蛋白质上的氨基形成schif 键(N=C<,在半抗原和蛋白质间引入一个5碳桥。这一反应条件温和，可在4~40°C及pH6.0~8.0内进行，操作亦简便，因此应用广泛。戊二醛受到光照、温度和碱性的影响，可能发生自我聚合，减弱其交联作用，因此经常使用新鲜的戊二醛。

2)重氮化法:

用于活性基团是芳香胺基的半抗原，芳香胺基与NaNO2和HCl反应得到一个重氮盐，它可直接接到蛋白质酪氨酸羧基的邻位上，形成一个偶氮化合物。

3. 含羟基半抗原的偶联

)琥珀酸酐法:

半抗原的羟基与琥珀酸酐在无水吡啶中反应得到一个琥珀酸半酯(带有羧基的中间体)，再经碳二亚胺法或混合酸酐法与蛋白质氨基结合，在半抗原与蛋白质载体间插入一个琥珀酰基。

2)羰基二咪唑法: N，N'-羰基二咪唑是引入羰基的高活性试剂，在肽合成中表明了是形成**的酰胺键试剂。

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