Phalloidin-CY3.5（鬼笔环肽-CY3.5 荧光探针）定制合成技术

一、分子设计原理

鬼笔环肽（Phalloidin）是一种从毒伞属蘑菇中分离得到的七肽环肽，能够 高度特异性结合 F-Actin（纤维状肌动蛋白），而不与单体 G-Actin 结合。其独特的结合特性使得鬼笔环肽成为 细胞骨架成像、微丝动态研究 的理想分子探针。

CY3.5（近红外橙红荧光染料 3.5，Cyanine 3.5）是一种 激发波长约 581 nm、发射波长约 596–610 nm 的荧光团，亮度高、光稳定性好，同时自发荧光干扰较低。与传统 CY3 相比，CY3.5 光谱向红移，更适合深层组织成像。

因此，Phalloidin-CY3.5（鬼笔环肽-CY3.5 荧光探针）的设计目标是：

保留鬼笔环肽对 F-Actin 的高亲和力；

通过化学偶联，将 CY3.5 稳定连接在鬼笔环肽的活性位点上；

确保荧光团的光学性能不受偶联反应影响；

兼具 高水溶性与生物相容性，可应用于固定细胞及部分活细胞实验。

二、定制合成技术路线

Phalloidin-CY3.5 的合成主要包括以下步骤：

原料准备

鬼笔环肽（Phalloidin，≥95% 纯度）；

CY3.5 荧光团活性酯（CY3.5-NHS ester）或 CY3.5 马来酰亚胺（CY3.5-Maleimide）；

适配的有机溶剂（DMSO、DMF）与缓冲液（PBS、碳酸盐缓冲液）。

活化反应
选择鬼笔环肽分子上 氨基（-NH2）或巯基（-SH） 作为偶联位点。CY3.5 的 NHS 酯与氨基发生酰胺化反应，或 CY3.5-Maleimide 与巯基进行 Michael 加成反应。

偶联反应条件优化

反应温度：4–25 ℃（避免荧光团降解）；

pH 范围：7.4–8.5（保证胺基活性，同时保护肽链结构）；

摩尔比：Phalloidin : CY3.5 ≈ 1 : 1.2（适当过量染料保证完全反应）。

纯化与检测

高效液相色谱（HPLC）纯化得到单一偶联产物；

MALDI-TOF 质谱确认分子量；

紫外-可见光谱和荧光光谱确认光学性能；

F-Actin 结合实验验证生物活性。

三、关键工艺要点

控制反应位点选择性：避免多点偶联破坏鬼笔环肽与 F-Actin 的结合能力；

保护荧光团稳定性：反应需避光进行，溶液中避免过量活性氧；

缓冲液选择：使用无伯胺缓冲体系（如碳酸盐缓冲液），避免与 NHS 酯副反应；

纯化工艺：优选反相 HPLC，收集主峰组分，保证单一标记；

冻干与保存：制备后需冻干成粉，储存在 -20 ℃ 避光条件下。

四、技术优势与性能

高特异性：完全保留 Phalloidin 与 F-Actin 的结合活性；

优良光学性能：CY3.5 发射位于 596–610 nm，信号亮度高，背景干扰低；

适合多重成像：可与 FITC（绿光）、CY5（远红光）等荧光探针组合使用；

生物相容性好：水溶性强，适合固定细胞染色及部分活细胞透化实验；

光稳定性高：长时间激光扫描不易漂白，适合共聚焦与超分辨显微镜。

五、应用场景

细胞骨架成像：用于固定细胞中 F-Actin 微丝结构的荧光标记；

活细胞实验：在轻度透化条件下，实现对动态微丝网络的监测；

多重荧光成像：与 DAPI（细胞核）、MitoTracker（线粒体）、CY5-Phalloidin（鬼笔环肽-CY5 探针）联合使用，实现亚细胞水平的多色成像；

超分辨显微镜（STED、SIM）：利用 CY3.5 的光稳定性和较长波长优势，实现高分辨率的 F-Actin 成像；

组织成像：用于厚组织切片或透明化组织中的细胞骨架染色。

六、推荐合成策略或典型产品方案

Phalloidin-CY3.5（鬼笔环肽-CY3.5 探针，固定细胞专用）：适合常规免疫荧光实验；

Phalloidin-CY3.5 高纯度冻干粉：提供 ≥95% HPLC 纯度，适合科研定量实验；

多重成像配套方案：Phalloidin-CY3.5 + Phalloidin-CY5.5 + DAPI 组合，用于共聚焦显微镜三色成像；

活细胞兼容版本（低毒透化条件下使用）：在 PEG 保护下改善细胞摄取。 

产地：西安齐岳生物

用途：科研

以上资料由西安齐岳生物小编zhn提供，仅用于科研  

运输说明：

极低温产品：极低温产品运输过程中加装干冰运输。

低温产品：低温产品运输过程中加装专用冰袋运输。

常温产品：常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。

关于我们：

西安齐岳生物专注于纳米载体的研发与定制服务，提供多种类型的纳米递送系统，包括脂质体、纳米囊泡、聚合物纳米粒及膜仿生纳米载体等。公司可根据客户需求实现药物、蛋白、核酸及光敏剂等负载，支持靶向修饰、响应性控释及表面功能化。齐岳生物在材料选择、粒径控制、表面修饰及负载效率方面具有丰富经验，可为科研和临床前研究提供高质量、个性化的纳米载体解决方案，旨在提升药物递送效率、靶向性及生物安全性，为精准治疗和多模态诊疗提供有力支持。

相关推荐：                                         

Diazo Biotin-PEG3-DBCO 重氮生物素-三聚乙二醇-二苯并环辛炔

Celastrol 雷公藤红素 CAS:34157-83-0）

PC Biotin-PEG3-alkyne 生物素-三聚乙二醇-炔烃

PC Biotin-PEG3-Azide 生物素-三聚乙二醇-叠氮

PC Biotin-PEG3-NHS carbonate ester 生物素-三聚乙二醇-碳酸盐活性酯