Cyanine5-PEG-Polylysine，CY5-聚乙二醇-聚赖氨酸的偶联反应

CY5-PEG-Polylysine 为将近红外荧光团（Cy5）通过聚乙二醇（PEG）连接至聚赖氨酸（poly-L-lysine，简称 PLL）的一类荧光标记阳离子聚合物，常用于基因递送载体、细胞标记和生物材料表面修饰。下述为可重复的合成与纯化流程要点与优化建议。

试剂与前体设计

• 选择 PLL 型号（分子量范围常见为 3–70 kDa，或短寡聚赖氨酸 K10–K30）以决定带电密度与细胞相容性。

• 选用一端带活化基团的 Cy5-PEG-X（X = NHS 酯、maleimide、DBCO 等），常用 Cy5-PEG-NHS 用于与赖氨酸 ε-NH2 偶联；PEG 长度（PEG-500–PEG-5000）根据亲水性/空间隔离需求确定。

偶联反应（典型条件）

• 溶剂与缓冲：在去除胺类干扰的磷酸盐緩冲（PBS pH 7.4）或碳酸氢盐缓冲（pH 8.0–8.5）中进行。若溶解性欠佳，可用少量 DMSO/DMF 作为辅溶剂（总体溶剂含量 <10%）。

• 摩尔比与温度：控制 Cy5-PEG-NHS : PLL 的当量以调控标记度（DOL）。常用当量 0.1–1.0 eq（以赖氨酸残基计）用于低标记度，或 1–5 eq 用于高标记度。反应在 0–4°C 到室温避光 30 min–4 h，短时间有助于减少交联。

• pH 控制：NHS 酯在 pH>9 易水解，pH 7.5–8.5 为佳；若使用 maleimide，需在 pH 6.5–7.5 以避免胺类副反应。

终止与去除未反应试剂

• 终止：加入甘氨酸或乙醇胺（10–50 mM）终止剩余 NHS 酯反应。

• 初步去除：通过透析（合适 MWCO）、超滤（Amicon 膜，MWCO ≥ 聚合物分子量下限）去除游离 Cy5-PEG 小分子及低分子杂质；若体系含 DMSO，应先稀释以利膜分离。

纯化手段（可联合使用）

• 尺寸排阻色谱（SEC/GPC）：去除低分子染料并分离不同标记度的产物。对高分子 PLL 常用 Superdex/Sepharose 系列填料。

• 透析与离心过滤：成本低、易放大，用于去除小分子与溶剂交换。

• 离子交换色谱（IEX）：利用 PLL 带正电的特性分离不同取代度产物（在适当 pH 下调整表面电荷差异）。

• RP-HPLC：不常用于高分子，但对短寡聚物或低分散样品是高分辨选择。

表征与质量控制

• 吸收/荧光光谱：记录 Cy5 吸光峰（约 650 nm）与荧光发射谱，计算标记度（DOL = (A650/εCy5) / (A280 − A650×CF)/εprotein）。

• SDS-PAGE（荧光扫描 + 染色）：检测共价结合、聚集或降解片段（注意高分子跑板特性）。

• GPC/SEC（配 UV/RI 检测）：评估分子量分布与聚集。

• MALDI-TOF 或 ESI-MS：若分子量允许，确认分子量与修饰数；对高分子可用片段/降解产物分析。

• 核磁（1H NMR）：观察 PEG 和末端基团信号（在低分子 PLL/寡聚物时有效）。

常见问题与优化要点

• 过度标记导致胞毒或聚集：优先从低 DOL 开始，逐步优化。

• 交联与交互反应：控制活性试剂当量与反应时间，避免高温与强碱。

• 溶解性问题：适当选择 PEG 长度或通过盐/溶剂调节。

• 标记稳定性：产品避光、低温保存，缓冲中可加入剂（少量抗坏血酸或 BHT）。

产品名称：Cyanine5-PEG-Polylysine，CY5-聚乙二醇-聚赖氨酸

纯度：95%+

性状：固体或液体

储藏条件：-20°C干燥避光保存

包装规格：50mg  100mg  250mg  500mg（按需提供）

厂家：齐岳生物

关于我们

齐岳生物供应近红外荧光花菁染料标记各种官能团的定制服务，如活性酯（NHS酯）、马来酰亚胺（MAL）、叠氮（N₃）、炔基（alkyne）等，便于与蛋白质、肽、多糖、抗体、寡核苷酸、纳米颗粒等共价偶联。可选择多种功能团与目标分子进行精准结合，实现对蛋白质、多肽、抗体、核酸或纳米材料的荧光修饰。此外，齐岳生物还提供定制染料标记服务，包括肽类、蛋白类、小分子、糖类等不同类型标的物，满足用户在科研、成像等多方面的个性化应用。

推荐产品：

Sulfo-cy5.5-羧基，Sulfo-cy5.5-COOH，

Sulfo-CY5-COOH 水溶性cy5羧基

Sulfo-Cy5-NHS 水溶性CY5活化酯

sulfo-cy5-sh 水溶性cy5巯基

Sulfo-cy5-氨基，Sulfo-cy5-NH2，

仅供科研，不能用于人体实验AXC.2025.06.23