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Biotin-SS-Tyramide 生物素-二硫键-酪胺的作用机制
发布时间:2025-09-29     作者:zyl   分享到:

Biotin-SS-Tyramide(生物素-二硫键-酪胺)是一种常用的生物素化试剂,它结合了 生物素(Biotin)标记、二硫键(–SS–)可裂解连接子以及酪胺(Tyramide)活性基团,在分子标记和信号放大实验中具有重要作用。这类分子通常应用于 酪胺信号放大(Tyramide Signal Amplification, TSA)体系,同时由于引入了 二硫键连接子,在实验后还能够通过还原剂切断,从而释放生物素,实现灵活的可逆标记与下游分析。

结构组成与功能特点

Biotin 部分

生物素是一种亲和素(Avidin)或链霉亲和素(Streptavidin)的高亲和性配体,结合常数高达 10^-15 M,几乎是不可逆的。这一特性使 Biotin 成为常用的分子标签之一,可以实现灵敏的检测和高效的捕获。

在 Biotin-SS-Tyramide 中,生物素部分是最终的检测与富集标签。

SS(二硫键)连接子

二硫键是一种 可裂解的化学键,在温和的还原条件下(如 DTT、TCEP、谷胱甘肽等)可被断裂。

该设计使得生物素标记具有可逆性,研究人员可以在需要时去除或释放生物素标签,这在蛋白质组学、分子捕获与后续质谱分析中尤为重要。

Tyramide 部分

Tyramide 是一种能够在过氧化物酶(如 HRP, 辣根过氧化物酶)催化下被氧化的分子。

在 HRP 和 H2O2 存在下,tyramide 会转化为高度活性的自由基,这些自由基能够与蛋白质中的酪氨酸残基(–OH 基团)共价结合,从而将 Biotin 标签锚定到目标蛋白质或组织中。

这种信号放大方式可使检测灵敏度提高数十倍甚至上百倍。

作用机制

Biotin-SS-Tyramide 的标记过程一般包括以下几个步骤:

靶标识别:研究人员通常将 HRP 偶联到一抗或二抗,用于特异性识别目标分子。

酪胺反应:在 H2O2 存在下,HRP 催化 Biotin-SS-Tyramide 的酪胺基团转化为自由基。

共价结合:这些自由基与邻近蛋白质或组织中的酪氨酸残基发生偶联反应,从而在靶标周围沉积大量 Biotin 标签。

信号放大:沉积的 Biotin 可以结合荧光标记的链霉亲和素,或与酶偶联的链霉亲和素结合,从而放大检测信号。

可逆释放:如果需要进一步分析,可以通过还原剂切断二硫键,释放已标记的 Biotin 分子或使结合可控。

Biotin-SS-Tyramide

名称:Biotin-SS-Tyramide

用途:科研

状态:固体/粉末/溶液

保存:冷藏

供应:西安齐岳生物科技有限公司

应用领域

免疫组织化学(IHC)与免疫荧光(IF)

Biotin-SS-Tyramide 可用于 HRP 介导的免疫染色实验,实现高的信号放大效果,特别适合检测低丰度蛋白质。

原位杂交(ISH/FISH)

在核酸检测中,通过 TSA 系统实现探针信号增强,大幅度提升核酸杂交检测的灵敏度。

蛋白质组学与质谱分析

通过二硫键可裂解特性,Biotin 标签可在质谱分析前去除或释放,减少干扰并实现目标蛋白质的进一步鉴定。

分子捕获与纯化

Biotin 标签可与链霉亲和素磁珠结合,用于目标分子的捕获与富集;随后可通过还原切断二硫键,实现可控洗脱。

细胞与活体标记

可用于细胞表面蛋白的可逆标记,结合荧光链霉亲和素实现显微成像。

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